A tecnologia DPO™ é uma forma inovadora de amplificação de múltiplos alvos que aumenta a especificidade do alvo e minimiza amplificações não-específicas que comumente ocorrem na PCR multiplex. A tecnologia DPO™ redefine a PCR multiplex de alta complexidade permitindo a detecção de muitos alvos em um único tubo, sendo muito adequada para PCR em tempo real multiplex.
Design gratuito de primers com a tecnologia DPO™
Primers DPO™, estruturalmente diferentes de primers convencionais, são compostos por duas porções iniciadoras conectadas por uma sequência Poly-dI. O comprimento da porção 5’ (estabilizante/estabilizadora) é maior que a porção 3’ (determinante). A sequência Poly-dI forma estrutura semelhante a uma bolha à uma temperatura específica de anelamento e controla os dois passos das reações iniciadoras, necessárias para que a polimerase estenda o primer DPO™. Com um primer DPO™ a ligação inicial se dá na porção 5’, e a subsequente extensão do primer é controlada através de anelamento mais específico na porção 3’.
Passo 1. Primeira reação iniciadora
A extremidade 5’ mais longa se liga preferencialmente ao DNA template e inicia o “anelamento estável”.
Passo 2. Segunda reação iniciadora
A extremidade 3’ mais curta se liga seletivamente à sequência alvo e determina uma “extensão alvo-específica”.
Especificidade incomparável através da eliminação de falsas extensões
Primers DPO™ evitam a geração de sinais falsos positivos através do bloqueio da extensão do primer em sequências não-alvos, fornecendo uma especificidade incomparável em PCR multiplex.
A. Apesar de a extremidade 5’ mais longa ligar-se a uma sequência não-alvo, a porção mais curta resiste a extensões não-específicas.
B. A porção 3’ mais curta, por si só, não é capaz de iniciar reações em temperatura de anelamento.
O ensaio de PCR DPO™ multiplex é o método mais preciso, rápido e econômico.
Exemplo
Comparação de resultados de PCR multiplex com primer DPO™ vs. com primer convencional
O primer DPO™ eliminou amplificações não específicas e produziu somente bandas para alvos. O primer convencional, por outro lado, não eliminou a amplificação não-específica.
A. Primer convencional
P: marcador positivo N: marcador negativo / Pistas 1 a 5: amostras
B. Primer DPO™
P: marcador positivo N: marcador negativo / Pistas 1 a 5: amostras
Artigos técnicos
Dual priming oligonucleotide system for the multiplex detection of respiratory viruses and SNP genotyping of CYP2C19 gene
Jong-Yoon Chun*, Kyoung-Joong Kim, In-Taek Hwang, Yun-Jee Kim, Dae-Hoon Lee, In-Kyoung Lee and Jong-Kee Kim ｜Nucleic Acids Research, 2007, Vol. 35