A tecnologia TOCE™ é uma solução química muito elegante para uma PCR em tempo real multiplex homogênea. TOCE™ supera as atuais limitações técnicas da PCR em tempo real por sonda de hibridização e explora a totalidade do potencial da PCR em tempo real em análises multiplex através de uma exclusiva geração de sinal e análise de temperatura de melting por novos componentes. A tecnologia TOCE™ permite detectar e diferenciar múltiplos alvos em um único tubo, além de fornecer resultados quantitativos através de análise cíclica da temperatura de melting do Catcher (cyclic-CMTA).
O novo paradigma para PCR em tempo real multiplex
1. Alta multiplicidade em um único canal usando a técnica Catcher-Tm.
2. Controle do perfil Catcher-Tm.
3. Valores consistentes de Catcher-Tm independente de variações de sequência.
4. Tão sensível quanto PCR em tempo real singleplex.
5. Múltiplas análises quantitativas usando cyclic-CMTA em um único canal.
6. Alta taxa de detecção de mutações pontuais em um único tubo.
Princípios da tecnologia TOCE™
Os componentes chave da tecnologia TOCE™ são pares de primers DPO™, Pitchers e Catchers. Os primers DPO™ fazem a amplificação altamente específica da região alvo. O Pitcher é um oligonucleotídeo marcador que hibridiza especificamente com a região alvo. O Catcher é um template artificial duplamente marcado.
A atividade da nuclease 5’ cliva especificamente um Pitcher ligado ao alvo, liberando a região de marcação. Essa região hibridiza com a porção de captura do Catcher. A formação da dupla fita induz a extensão do Catcher, resultando na geração do sinal fluorescente. O sinal pode ser analisado em tempo real ou por curva de melting.
Análise quantitativa através de cyclic-CMTA
No painel da esquerda estão destacados os ciclos pré-selecionados durante o processo de amplificação que são submetidos à análise de curva de melting (pontos CMTA, indicados com ①, ② e ③). O painel da direita mostra a ocorrência de picos de melting para o alvo em três titulações diferentes. O pico de melting aparece no primeiro ponto CMTA no alvo de maior titulação, no segundo ponto CMTA na titulação intermediária e no terceiro ponto CMTA na titulação mais baixa.
Artigos técnicos
Seegene Bulletin – VOLUME 1 JULY 2012
The Science and Business of Molecular Diagnostics
- High Multiplex Molecular Diagnostics – Shifting the Diagnostics Paradigm ｜ Jong-Yoon Chun. Ph D
- TOCE : Innovative Technology for High Multiplex Real-time PCR ｜ Dae-Hoon Lee, Ph.D
- cyclic-CMTA : An Innovative Concept in Multiplex Quantification ｜ In-Taek Hwang, Ph.D